Passaggio 1: sciogliere il peptide grezzo di Melanotan I in 100 ml di acqua purificata e filtrare la miscela attraverso una membrana da 0,45 μm per ottenere una soluzione di peptide grezzo.
Passaggio 2: purificare il peptide melanotan I grezzo utilizzando la cromatografia liquida ad alte-prestazioni (HPLC). Utilizzare una colonna a compressione assiale dinamica DAC-HB50 con un processo di eluizione a gradiente, impiegando la fase mobile A (0,05% in peso di acido trifluoroacetico in acqua) e la fase mobile B (0,05% in peso di acido trifluoroacetico in acetonitrile). Monitorare il campione utilizzando un rilevatore UV e raccogliere la soluzione peptidica corrispondente al picco target in frazioni.
Passaggio 3: dopo la purificazione HPLC, ottenere 180 mL di soluzione di trifluoroacetato di Melanotan I con una purezza superiore al 99%; concentrare questo tramite evaporazione rotante per produrre 50 mL di soluzione.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >purezza del 99%). Eluire per 50 minuti utilizzando un sistema di acido acetico acquoso al 2%. Concentrare il prodotto target raccolto a 80 mL tramite evaporazione rotativa, quindi sottoporlo a processi di pre-liofilizzazione e liofilizzazione. Infine, ottenere 5,33 g di peptide Melanotan I ad elevata purezza, che rappresenta una resa del 32,33%.